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简答题蛋白质分离、纯化的一般步骤是什么？提纯过程中要注意哪些问题？（章节：第五章 难度：4)
  • 一般步骤：（一）材料的预处理及细胞破碎（破碎方法：1. 机械破碎法，2. 渗透破碎法3. 反复冻融法4. 超声波法5. 酶法）；(二) 蛋白质的抽提；（三）蛋白质粗制品的获得（1. 等电点沉淀法2. 盐析法3. 有机溶剂沉淀法）；（四）样品的进一步分离纯化 注意问题：蛋白质维持在一定浓度范围；有合适的pH以及温度；使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解；避免样品反复冻融和剧烈搅动，以防蛋白质的变性；防止蛋白质的氧化；使用灭菌溶液，防止微生物生长。

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