[方法] 血抹片瑞特染色。 [操作] (1)按无菌操作取血样，第一滴血弃去，取末梢血1滴置于已编号的洁净载玻片的一端。一只手持载玻片，另一只手以边缘平滑的推片的一端，从血滴前方后移接触血滴，使血滴沿推片边缘散开。然后使推片与载片夹角保持30°～45°，平稳地向前移动，推成一张头体尾分明的薄层血膜。 (2)待干。用蜡笔在血膜两端画线，然后将血膜平放在染色架上。 (3)加瑞特染液数滴，使之覆盖整个血膜，固定0．5～1分钟。 (4)滴加等量或稍多的缓冲液，轻轻晃动载玻片，使之与染料自然混匀，染色数分钟。 (5)用清水冲去染液，待干，油镜镜检。 [注意事项] (1)血膜必须充分干燥，然后染色。 (2)染色时间与染料浓度、室温高低及细胞多少有关，因此染色时间必须灵活掌握。 (3)冲洗时应以流水将染液冲去，不能先倒掉染液再冲，以免染料沉着于血片上。 (4)染色时应注意保护血膜尾部细胞，不能划掉。 (5)注意观察有无各种异常细胞、寄生虫以及各种细胞大小及分布情况。 [提问] 1．什么病理情况下会出现中性粒细胞增加或减少? (1)增加：急性感染和化脓性炎症、中毒(如尿毒症、糖尿病酸中毒)、急性出血、急性溶血及手术后等。 (2)减少：某些传染病(伤寒、疟疾等)、化学药品及放射损害、某些血液病、过敏性休克、恶病质、脾功能亢进及自身免疫性疾病等。 2．什么病理情况下淋巴细胞增加或减少? (1)增加：淋巴细胞性白血病、百日咳、传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症、水痘、麻疹、结核病、器官移植排斥反应前期、传染病恢复期等。 (2)减少：免疫缺陷病、丙种球蛋白缺乏症、淋巴细胞减少症、应用肾上腺皮质激素后、放射病等。 3．什么病理情况下单核细胞增多? 常见于亚急性感染性心内膜炎、伤寒、疟疾、黑热病、活动性结核、单核细胞性白血病、急性感染恢复期等。 4．中性粒细胞在什么情况下可出现哪些毒性变化? 严重感染、恶性肿瘤、严重传染病、败血症、中毒(药物或重金属)、大面积烧伤等情况下，中性粒细胞可出现毒性颗粒、空泡、Dohle体、核棘突、退行性变及细胞大小不均等变化。 5．Dohle体有什么特点? Dohle为中性粒细胞胞浆因毒性变化而保留的嗜碱性区域，胞浆内出现嗜碱性点、线、梨形或云雾状物质，直径为1～2μm。 6．瑞特染液中甲醇起什么作用? 瑞特染料是伊红和亚甲蓝两种水溶液混合后形成的沉淀物，即伊红化亚甲蓝。此物不溶于水，只溶于醇类，而又以甲醇为最好，故以甲醇溶解伊红化亚甲蓝。同时甲醇具有很强的脱水作用，并能使细胞蛋白质迅速固定，因此又是良好的固定剂。 7．染片时为什么要加缓冲液? 瑞特染料对氢离子浓度很敏感，染色时如酸碱度有改变，蛋白质与染料所形成的化合物可重新解离而影响染色效果，故加适当的缓冲液作为稀释液，可使染色效果更佳。缓冲液以pH6．4～6．8为宜(KH2PO4 0．3g、Na2HPO4 0．2g，加蒸馏水至1000mL)。 8．为什么制血膜后染色时，头体尾部均应染色? 各种白细胞的体积和相对密度不同，在血片中分布很不均匀。一般体积较小、相对密度较大的淋巴细胞多分布在头体部。而体积较大、相对密度较轻的粒细胞和单核细胞则在尾部和两侧较多，异常大的细胞则常在片尾出现。故头体尾兼顾，有利于发现各种细胞，避免错检或漏检。计数时，应循一定方式有规律地移动视野，如多采取““方式移动视野，不能只固视于一处。 9．计数白细胞数有无规定? 1983年全国临床检验方法学学术讨论会推荐方案规定：白细胞数为3×10⁹～15×10⁹／L者，计数100个白细胞。白细胞数>15×10⁹／L者，计数200个。白细胞数<3×10⁹／L者，可用两张血片计数50～100个。 10．分类计数中如发现幼稚或异常白细胞应如何处理? 应分别报告，但包括在白细胞分类计数的百分数中。