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简答题ABO血型正、反血型鉴定
  • (一)试管法 【操作】 1．正定型： (1)取3个干净小试管分别标明抗a、抗b和抗a+b；分别用滴管加各种经过检定合格的标准血清2滴于相应的试管内。 (2)用滴管取3％～5％受检者红细胞生理盐水悬液2滴加于上述3个小试管内。混匀，在室温稍待片刻。 (3)1000r／min离心。 (4)取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻轻弹动试管，观察凝集情况；如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜检查。 2．反定型： (1)取3个干净小试管分别标明a、b、o，于每个小试管内加受检者新鲜血清2滴。 (2)分别用滴管吸取3％～5％a、b、o试剂红细胞生理盐水悬液2滴于各个已标明的小试管内。混匀，在室温放置片刻。 (3)1000r／min离心。 (4)取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻轻弹动试管观察凝集情况。如肉眼不见凝聚，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜观察。 【注意事项】 1．标准血清要求：有批准生产文号，并经批准检定。购回的标准血清，本室应复检，符合要求方可使用。 2．用本法，不论正、反定型或交叉配血试验，均应先加血清再加红细胞悬液。 3．不得混用滴管；不得将已取过样品或污染的滴管与试管内容物接触。 4．离心的速度和时间均应严格控制。 5．正、反定型结果符合才能发出报告，否则应检查原因。 6．红细胞悬液不得过浓或过淡。 7．注意冷凝集、假凝集和细菌性凝集与真凝集(包括弱凝集)的区别。观察并记录凝集强度，因其有助于对亚型、类b或cisab的发现。 8．报告单上应书写收样品及发报告的日期和时间，化验者签全名。 【提问】 1．abo血型鉴定为什么要做反定型? 防止正定型的差错或某些情况下红细胞上abo血型抗原减弱或暂时"变异"。进行反定型时可从受检者血清中的abo血型抗体核对红细胞上的抗原。但如有低丙种球蛋白血症者等情况血清定型中将不见凝集或只见弱凝集。 2．abo血型鉴定为什么要在室温中进行? abo血型鉴定所用的标准血清为igm抗体，igm抗体为冷抗体，与相应红细胞抗原反应在4℃时最强，为了防止冷凝集，一般在室温进行。如在37℃下进行，可使反应减弱。 3．如何处理冷凝集? 可将红细胞用37℃(温度不可过高!)生理盐水洗涤，以除去夹杂红细胞间和夹杂于血清中的冷凝集素。或将反应试管用逐步加温法加热至37℃，以除去干扰。 4．什么情况下可出现串钱状凝集? 血清蛋白紊乱病人或试管中水分蒸发均可出现串钱状凝集，此时可用生理盐水洗涤红细胞或加少量生理盐水稀释即可除去，并应了解病人诊断，以资证实。 5．反应试管内如出现溶血。有何意义? 由于新鲜血清中有补体，抗原抗体复合物与补体结合，可发生溶血，故进行反定型或交叉配血试验时发现试管内有溶血现象或在镜检下红细胞有减少趋向。其意义与凝集相同，不可忽视。 6．哪些血型可出现亚型?如何鉴别? a型有a、a、a、a、a等；b型也有与a亚型相应名称的亚型。可从混合外观及吸收和放散能力鉴别。对a、a可用抗a血清鉴别。 7．除正、反定型外，还可用什么方法证实abo血型? 常用的方法是检测唾液中的血型物质证实血型。但应注意只有80％的人唾液中有血型物质，还有20％的人体液中无血型物质。如要预测胎儿血型，亦可用羊水。 (二)微柱凝胶法 【操作】 1．撕开血型卡密封纸。 2．在正定型管各孔及质控管孔中，分别加入用低离子介质液配制的受检者5％红细胞悬液10μl。 3．在反定型管各孔中分别加入相应的0．8％的试剂红细胞50μl和受检者血清50μl。 4．置于专用离心机离心10分钟。 5．结果判断：如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳性结果。反之，如红细胞沉于凝胶管底尖部，则为阴性结果。质控管应为阴性结果。 【注意事项】 (1)操作前微柱凝胶卡和受检者标本均须离心。 (2)操作过程中须先加红细胞悬液再加血清。 (3)红细胞悬液配制应准确，不可太浓或太稀。 (4)用微量加液器，加样要准确。 (5)质控管结果应为阴性。 【提问】 1．微柱凝胶法是根据什么原理而设计的? 微柱凝胶法是根据生物化学凝胶过滤技术和离心技术以及免疫学抗原抗体特异性反应原理而设计的。红细胞血型抗原抗体特异性结合后形成凝集，悬浮于凝胶上层(根据凝集强弱亦可弥散于凝胶中)；而未结合的红细胞，则沉于凝胶管底尖部。 2．微柱凝胶法是如何鉴定abo血型的? 微柱凝胶法利用微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗a、抗b血清试剂检测红细胞上相应的血型抗原和在微柱凝胶中用a型和b型试剂红细胞检测血清中相应的血型抗体。 3．微柱凝胶法有什么优点? 微柱凝胶法比传统的液体介质法进行血型血清学检查更准确、简单、敏感，并有质控对照，而且可以较长期保存，但成本较高。 4．微柱凝胶卡结构有几部分? 有反应腔和凝胶柱两部分。操作时应加红细胞，然后再加血清或抗体。

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