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简答题综述如何设计高质量的实时荧光定量PCR引物。
  • 设计引物时应注意①在实时荧光PCR中，单链引物的最适 长度为15？20bp，GC含量在20%？80%(45%？55%最佳)。②TaqMan引物的Tm值最好 应在68？70°C，分子信标和杂交探针相关引物的Tm值变化区间可大一些，但对于同一对 引物而言，其Tm值应接近，差异不要超过2°C。③为了尽量减少在PCR反应过程中非特异 扩增，引物的3’端最好不为G和（或）C。引物3#端的5个碱基不应出现2个G和（或）C。 如果用SYBR Green I方法，所用的PCR引物应尽量避免形成明显的引

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