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多项选择题PCR引物设计的原则包括

A、引物长度以18～25个核苷酸为宜

B、5端的第一、二个碱基影响Taq DNA聚合酶的延伸效率，与模板应严格配对

C、3端可加修饰成分，如酶切位点、生物素标记等，便于产物分析和克隆等

D、通常位于基因组DNA的高度保守区，最好跨越两个外显子

E、GC含量以45%～55%为宜

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