A、组织中难于提纯抗原性物质，制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体，以至容易混淆

B、抗体分子上标记的荧光素分子太多，荧光过于明亮而呈现非特异性染色

C、抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合

D、一部分荧光素未与蛋白结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去

E、除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原，可与组织中特异性抗原以外之相应抗体结合