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简答题ELISA操作的注意事项有哪些?
  • ELISA操作注意事项如下： (1)加样：在ELISA中除了包被外，一般需进行4～5次加样。在定性测定中有时不强调加样量的准确性，例如规定为加样1滴。此时应该使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求准确。标本和结合物的稀释液应按规定配制。加样时应将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出现气泡。 (2)孵育：在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加结合物后，此时反应的温度和时间应按规定的要求，保温容器最好是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在一起。为避免蒸发，板上应加盖，或将平板放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒应该是金属的，传热容易。如用保温箱，空湿盒应预先放在其中，以平衡温度，这一步骤在室温较低时更为重要。加入底物后，反应时间和温度通常不做严格要求。 (3)洗涤：洗涤在ELISA过程中虽不是反应步骤，但却是决定成败的关键。洗涤的目的是洗去反应中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。 (4)显色及终止反应：显色是酶促反应，应按规定的温度和时间损伤，用酸终止。 (5)结果判断：用比色计测定结果，准确性决定于ELISA板底的平整与透明度和比色计的质量。

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