A、引物的长度在20-30bp

B、引物自身或引物之间不应存在互补序列，防止产生二聚体和发夹结构

C、引物中G+C的含量占45%-55%

D、引物的3'端可以带有生物素、荧光或酶切位点等作为标记

E、两条引物的Tm值应该尽量相近