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简答题分子克隆中常用的工具酶和作用及良好载体的条件 ( 难度:5 )
  • 工具酶:限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶Ⅰ、逆转录酶、多聚核苷酸激酶、末端转移酶、碱性磷酸酶;功能:识别特意序列切割DNA;连接DNA片段,使切口封合;合成DNA,填补3’-末端;合成CDNA ;是多聚核苷酸5’-末端磷酸化;使3’羟基加尾;切除末端磷酸基 。良好载体条件:1.必须有自身的复制子。2.载体分子上必须有限制性核酸内切酶的酶切位,即多克隆位点,以供外源DNA插入。3.载体应具有可供选择的遗传标志,以区别阳性重组子和阴性重组子。4.载体分子必须有足够的容量。5.可通过特定的方法导入细胞。6.对于表达载体还应具备与宿主细胞相适应的启动子、前导顺序、增强子、加尾信号等DNA调控原件。
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