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简答题探针标记中缺口平移法的原理 ( 难度:4 )
  • 用DNA酶I在DNA双链上随机切开若干切口,切口处形成3’-OH末端。大肠杆菌DNA聚合酶I从切口处开始作用,以另一条DNA链为模板,以标记DNTPs为原料,在水解核苷酸的同时沿切口进行修复,标记的核苷酸便随之参入新链中,故称:切口平行推移。利用大肠杆菌DNA聚合酶I同时具有的5’→3’核酸外切酶活性和5’→3’聚合酶活性,将预先用同位素或非同位素修饰的DNTP掺入到新合成的DNA探针中去。
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