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- 简答题简述实时荧光定量PCR中TaqMan探针技术的原理。 ( 难度：4 ）
- TAqMAn探针技术反应体系中除了有一对引物外还需要一条荧光素标记的探针。探针的5’端标记荧光报告基团R(rEport Group)，如6-羟基荧光素（6-CArBoxyFluorECEin，FAM)、 -四氯-6-羟基荧光素(tEtrAChliro-6-CArBoxyFluorECEin? TET)、六氯-6-羟基荧光素(hExAChloro- 6-CArBoxyFluorECEin, HEX)等。探针的3'端标记荧光淬灭基团Q (quEnChEr Group)，如6-羟基-四甲基罗丹明（6-CArBoxy-tEtrAmEthylrhoDAminE，TAMRA)。根据突光共振能量传递 (FRET)原理，当完整探针因R基团与Q基团分别位于探针的两端，距离很近而使R基团发 射的荧光被Q基团淬灭，导致没有荧光发射。在扩增过程中，TAq DNA聚合酶沿着模板移 动合成新链，当移动到与模板互补的探针处时，TAGDNA聚合酶同时还发挥其5’-3'核酸外切酶活性，从探针的5'端逐个水解脱氧核苷三磷酸，R基团与Q基团随之分离，破坏了 R基团与Q基团之间的FRET，因而，此时R基团不再受Q基团的抑制而发射出荧光，仪器的检测系统便可检测得到荧光信号。R基团信号的强弱程度与PCR反应产物的拷贝数成正比， 仪器的计算机软件系统根据标准曲线和反应产物的量计算出初始模板的拷贝数。由于探针 的水解发生在新链延长的过程中，因此荧光信号的检测在每一个循环的延伸过程中进行。 水解探针技术是目前病原体核酸检测商品化试剂中比较常用的技术，如用于HBV DNA检 测等。
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