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- 简答题探针的常用标记法 ( 难度：4 ）
- 1.缺口平移法：原理：用DNA酶I在DNA双链上随机切开若干切口，切口处形成3’-OH末端。大肠杆菌DNA聚合酶I从切口处开始作用，以另一条DNA链为模板,以DNTPs为原料，在水解核苷酸的同时沿切口进行修复，标记的核苷酸便随之参入新链中，故称：切口平行推移。利用大肠杆菌DNA聚合酶I同时具有的5’→3’核酸外切酶活性和5’→3’聚合酶活性，将预先用同位素或非同位素修饰的DNTP掺入到新合成的DNA探针中去。2.随机引物法：随即引物是人工合成的、含有各种可能排列顺序的六核苷酸片段（46）的混合物。可以与任何核酸片段杂交，以此作为聚合酶反应的引物。将这些引物与变性的DNA单链结合后，以4种DNTP（其中一种是标记物标记的DNTP）为底物，合成与探针DNA互补的切带有标记物的DNA探针。3.聚合酶链反应（PCR）标记DNA探针：在PCR反应底物中，将一种DNTP换成标记物标记的DNTP，这样标记的DNTP就在PCR反应的同时掺入到新合成的DNA链上。4.RNA探针的标记：RNA聚合酶体外转录法制备，一边合成一边标记。5.寡核苷酸链探针的标记：可以通过在寡核苷酸合成时加入特定标记的核苷酸来实现，也可以通过DNA探针的末端标记法对其3’或5’末端进行标记。6.末端标记法：只是将DNA片段的一端进行标记。
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