简述纸片扩散法的原理及方法。

正确答案：答：(1)原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。(2)试验方法：采用直接菌落法或液体生长法。用0.5麦氏浊度菌液浓度，15分钟内接种完毕。步骤如下：a.用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余的菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂抹3次，每次旋转平板60℃，最后沿平板内缘涂抹1周；b.平板室温下干燥3～5分钟，用纸片分配器或无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm，纸片贴上后不可再移动。c.置35℃孵育16～18小时后阅读结果，但甲氧西林和万古霉素药敏实验结果应孵育24小时。
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