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- 简答题简述PCR技术的基本原理及基本反应步骤。
- (1)PCR的基本原理是以需要扩增的DNA为模板,以一对分别与模板的5′和3′末端相互补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DNA片段得到扩增。 (2)PCR的基本步骤包括:①变性:将反应系统加热至95℃,使模板DNA全部变性变成单链DNA。②退火:将温度下降至适当温度,使引物与模板DNA退火结合。③延伸:将温度升至 72℃,DNA聚合酶以DNTP底物催化DNA的合成反应。上述三个步骤称为一个循环,这样的循环重复25~30次,就可以得到大量的目标DNA。
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