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简答题质粒DNA纯化的标准方法是什么?如何操作?
  • cscl-eb法是一种沉降平衡离心法,至今仍是质粒dna纯化的标准方法。经超速离心,离心介质cscl形成一连续的密度梯度,在过量eb存在的条件下,各种不同密度的物质经离心平衡后得以分开。蛋白质由于密度小(1.3~1.49/cm)而浮于液面,rna密度大而沉于管底,各种dna密度介于蛋白质与rna之间,处于中部。细菌染色体dna与不同分子构型的质粒dna的密度均为1.79/cm左右,难以区分,经过量eb处理后,不同分子构型的dna与eb的结合能力不一样,因而密度下降不一致,可将它们有效分离开。
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