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- 简答题简述HPLC分析时。固定相及流动相的选择。
- 答:根据被分离物质的化学结构、极性和溶解度等因素来选择固定相及流动相,应用HPLC法进行中药制剂有效成分含量测定时,一般都使用商品柱,大多数药物可用C(ODS)反相柱进行分离测定,因此建立分析方法时,可先试用C柱反相柱,不行再改用其他柱,可按以下原则进行:①弱极性、中等极性组分,选择C或C反相柱,流动相采用醇-水系列,通过调节醇一水比例控制保留值及分离选择性;②对具有酸碱性质、或具有离解性的物质,仍用C反相柱,可在流动相中加入缓冲液,抑制解离,或加入离子对试剂使之形成中性离子对化合物,采用离子抑制色谱或离子对色谱的方法测定;③对于极性较大物质,一般采用氨基、氰基等正相柱,以正己烷一异丙醇混合溶剂系统分离测定(也可以TLC为先导摸索合适流动相)。
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