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简答题细菌接种
  • [方法] 分区画线分离法。 [操作] 1．将培养皿用记号笔进行标本编号。 2．将接种环作火焰灭菌，待冷。 3．用接种环取标本，先涂布于平板1区(原划区)内并作数次画线，再在平板2区(次原划区)和平板3区(分离区)依次画线。接种完后将接种环火焰灭菌，将培养皿置孵育箱培养。 [注意事项] 1．在操作过程中应穿隔离衣，戴帽子、口罩，不讲话，不旁视，防止污染。 2．不能全部打开培养皿进行接种。应将装有培养基的平皿置于手掌内，皿盖侧向上，用手指固定平皿盖边缘，以减少污染机会。 3．接种时，应在酒精灯火焰上侧5～6cm处画线。 4．线与线间留有适当距离，不能做重复画线。 5．已蘸有细菌的接种环烧灼灭菌时，应先在还原焰中加热，烤干环端附着的细菌或标本，然后再移至氧化焰中烧红灭菌。亦可从连接金属柄部分的接种环开始通过火焰并逐渐移向环端，使环端附着的细菌或标本因金属的导热作用而被烤干，直至烧红为止。 [提问] 1．培养基平皿表面润湿时，影响分离效果，应如何处理? 应将平皿倒转斜置在皿盖上，皿盖应放在下面，在37℃下烘干片刻。 2．作分区画线时，为获得单个菌落，应怎样操作? 画完第一区后，每画完下一个区域，均将接种环灭菌1次，冷却后再画下一个区域。每一区域的画线均接触上一区域的接种线1～2次，使菌量逐渐减少。 3．接种完细菌或标本的环为什么不能直接在酒精灯火焰顶端(氧化焰)上烧灼灭菌?应如何操作? 直接将接种环在氧化焰中烧灼，则环上残余的细菌或标本可因突受高热而爆裂四溅，有污染环境和传播危险。正确操作方法是：染菌的环先于还原焰中加热，烤干环端附着的细菌或标本，然后再移于氧化焰中烧红灭菌。或将连接金属柄部分的接种环开始通过火焰并逐渐移向环端，使环端附着的细菌或标本因金属的导热作用而被烘干，直至烧红为止。 4．为什么不能用铁丝做接种环?若没有铂金丝制备接种环，可用什么金属代替? 因铁丝做的接种环，经反复烧灼后氧化成含碱的铁，可改变培养基的pH值，影响结果。若没有铂金丝制备接种环，可用300w的电炉丝代替，也可用市售的合金丝制备。 5．分区画线培养法主要目的是什么? 其主要目的是使标本或培养物中混杂的多种细菌在培养基表面分散生长，各自形成单个菌落。此即称为分纯。 6．不慎造成细菌或标本外溢污染台面或地面时，应如何处理? 用2％的“84“消毒液或5％苯酚浸泡污染台面或地面30分钟。 7．细菌生长繁殖的基本条件有哪些? 细菌生长繁殖需要水分、碳源、氮源、无机盐和维生素等物质。人工培养细菌还须满足几种环境条件：①适宜的酸碱度。②适宜的温度。③合适的气体。④一定的湿度。⑤在暗处培养。 8．何谓菌落?菌落有何实际意义? 细菌被画线接种在琼脂平板上，经孵育后每个细菌可以繁殖成一堆细菌集团，肉眼可见，称之为菌落。各种细菌的菌落大小、颜色、外形、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘是否整齐等方面都有不同，有助于识别和鉴定细菌。

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