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简答题病理制片技术
  • 病理制片包括常规制片和特殊制片，临床大量使用的是常规制片技术。 常规切片指石蜡包埋、苏木素一伊红(HE)染色的组织切片，是诊断病理学最重要和最基本的方法。即使有新的现代病理诊断技术不断问世，常规切片也是其重要基础。常规切片的优劣直接影响诊断的准确性，只有在优质切片的基础上才可能作出正确的诊断，其重要意义不言而喻。现将常规制片技术介绍如下。 【操作步骤】 (1)补充固定：若标本未完全固定好，应加以补充固定。 (2)脱水：固定好的标本经流水冲洗后，置入70％、80％、95％Ⅰ、95％Ⅱ、100％Ⅰ、100％Ⅱ的乙醇中逐级脱水，时间各为1～3小时。 (3)透明：脱水后的标本人二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ各30～60分钟透明。 (4)浸蜡：透明后的标本置入已溶解的石蜡内2或3次，整个过程3～4小时。 (5)包埋：将浸蜡后的标本放入包埋框内，倾入溶解的石蜡将组织包埋，待石蜡凝固后，将石蜡块周边修切整齐。 (6)切片：将石蜡组织块放入冰箱内冷冻片刻以增加石蜡块硬度，然后固定在切片机上进行修整，直至组织最大切片暴露时，即可开始切片。注意按需要调整切片厚度。 (7)贴附：将切好的切片放入50％的乙醇中展开，然后置入温水(约45℃)中进一步展开。若有细小皱褶，可用眼科弯镊将其轻轻撑开。选择完整、无皱褶、较薄的组织片贴附在玻片上，将玻片置60℃烤箱中烘烤30分钟以上。 (8)染色：①脱蜡：将切片置入二甲苯10分钟×2次，继之置人无水乙醇、95％乙醇、70％乙醇2分钟各1次，然后用自来水、蒸馏水洗片刻。②染色：将脱水脱蜡后的切片置于苏木素染液浸染2～15分钟，水洗片刻；然后置1％盐酸分化3～5秒，水洗片刻；置碳酸锂饱和水溶液内1分钟，流水洗10分钟以上，最后用1％的酸性伊红染液浸染1～3分钟。③脱水、透明和封固：将染色后的切片置于70％、95％、无水乙醇Ⅰ和无水乙醇Ⅱ中各1～2分钟，将切片烘干或用电吹风吹干，中性树胶封片，粘贴标签。 (9)结果：胞核呈蓝色，胞浆淡红色，结缔组织鲜红色，肌纤维深红色，红细胞橙红色。 【操作须知】 1．标本的固定必须及时和充分，否则影响切片质量。 2．标本脱水、透明过程既要充分又要防止过度，两者均能造成切片困难。 3．包埋时要注意蜡和组织的温度相对一致，温差太大时易造成组织与蜡块出现裂隙。避免夹取组织的镊子温度过高，否则易灼坏组织。 4．切片刀要锋利，刀的角度要合适。切片时用力要均匀一致，不宜过重过猛，也不宜过快，以免造成厚薄不均的现象。 5．染色液的配制要准确，染色各步骤的时间仅供参考，还需根据具体情况如温度、湿度和染色液使用时间长短等调整。 6．盐酸分化是染色的关键步骤之一，时间很短，需摸索出最佳时间。 7．切片封固时，树胶的浓度和量均要适中，既要避免过量而溢出，又要避免不足没有封到。同时要注意避免产生气泡，以免影响对切片的观察。 【提问】 1．病理与切片组织固定的目的和注意事项有哪些? 固定的目的在于：①保持细胞与生活时的形态相似。②可以防止组织自溶和细菌性腐败，能沉淀或凝固细胞内的物质，使其保持与组织在生活时相仿的成分。固定组织时，标本应尽可能新鲜，固定得愈及时愈好。另应使用足量的固定液，一般不少于组织块总体积的4倍。固定的容器不宜过小，防止组织与容器粘贴，以避免固定不良现象的发生。 2．简述病理切片染色中常出现的问题及纠正的办法。 (1)染色不匀：常因脱蜡不干净和组织固定不好而造成。应延长脱蜡时间，更换脱蜡溶剂。另外切片厚薄不均，分化不当也能引起染色不均，应针对问题进行处理。 (2)切片模糊不清：造成此种情况的原因主要是组织脱水透明不够，应倒回去重新脱水透明。也有的是由于组织固定不及时，组织变性，结果组织结构一片模糊，无法补救。 (3)染色失常：染料质量低劣或配制失常，染色和分化不适当，染液失效等原因，均可造成染色失常。应重新配制染液或者重染切片。

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