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简答题简述测定胆红素的方法原理。
  • 可采用重氮试剂法和酶法检测。 重氮试剂法:在pH6.5环境下，血清结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成偶氮胆红素;未结合胆红素在加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠作用下，破坏其分子内氢键，与重氮试剂发生反应，生成偶氮胆红素。加入碱性酒石酸钠后，使紫色偶氮胆红素（吸收峰530nm)转变为蓝绿色偶氮胆红素（吸收峰600nm)，提高了检测的灵敏度和特异性。 胆红素氧化酶法:胆红素在胆红素氧化酶（bilimbinoxidase，BOD)的催化下生成胆绿素，继而被氧化成淡紫色化合物。随着胆红素被氧化，黄色胆红素逐渐减少，在450nm吸光度下下降，其下降程度与胆红素被氧化的量相关。 在pH8.0条件下，未结合胆红素和结合胆红素均被氧化。因而检测波长450nm处吸光度的下降值可以反映总胆红素含量。加入十二烷基硫酸钠及胆酸钠等阴离子表面活性剂可以加促其氧化。 在pH3.7？4.5缓冲液中，BOD仅能催化结合胆红素反应，而未结合胆红素不能被氧化。用溶于人血清的二牛磺酸胆红素（ditaumbilimbin，DTB)作为标准品，通过检测450nm处吸光度的下降值，计算结合胆红素的含量。

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