试述PCR的主要操作步骤。

正确答案：①变性，将反应体系加热至95℃,使模板DNA完全变性成为单链，同时引物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消除；②退火，将温度下降至适宜温度（一般较Tm低5℃）使引物与模板DNA退火结合；③延伸，将温度升至72℃，DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述三个步骤称为一个循环，新合成的DNA分子继续作为下一轮合成的模板，经多次循环（25~30次）后即可达到扩增DNA片段的目的。
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