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简答题简述ALT活性的测定原理及方法学评价
  • ALT的测定原理:ALT可催化L-丙氨酸和α-酮戊二酸生成丙酮酸。丙酮酸、NADH和H+在LDH作用下可转化出NAD+，连续监测在340nm处NADH的吸光度下降速度来计算酶活性，该法属于酶耦联法。方法学评价：JFCC推荐方法将原法测定温度从30℃改为37℃，将a-酮戊二酸的用量从改良赖氏法的2mmol/L改为15mmol/L，基本满足了最大反应速度对a-酮戊二酸的用量要求，扩大了测定范围，提高了测定准确性，并对试剂组成做了详细的规定:①LDH应用兔肌来源的干粉制剂，不能选用硫酸铵悬浮液;②可加人叠氮钠和白蛋白来保持其活性;③酶制剂和白蛋白中应没有ALT和GLDH的污染。该法的缺陷是存在GLDH和内源性丙酮酸的干扰，但采用双试剂底物启动的模式和（或)延长延滞期可消除部分干扰。为了进一步减少干扰，测定过程中还要用无氨蒸馏水和不含杂酶的高纯度的试剂。

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