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简答题根据所学，综述如何保证PCR反应特异性？
  • 保证PCR反应特异性，需从PCR反应体系和扩增参数等方面注意。反应体系中:①模板：纯度要高；②从位置、长度、二级结构、碱基分布、Tm值以及末端修饰等方面合理设计引物③脱氧核苷三磷酸浓度一致，浓度不宜过高；④DNA聚合酶酶量不宜过多；⑤缓冲液中镁离子浓度达到最佳反应浓度。扩增参数包括温度、时间和循环次数。退火温度是保证PCR反应特异性前提，一般低于引物Tm值5℃左右。根据扩增片段长度决定扩增时间，长度过大，适当延长每个步骤时间。循环次数为20-40次，不宜过多。

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