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简答题柯柏反应比色法的反应原理、条件、应用范围以及测定中应注意的问题（ 难度：5)
  • 雌激素与硫酸-乙醇的呈色反应，在520nm附近有最大吸收，可用于雌激素类药物含量灵敏度测定。反应机制可能是雌激素分子的质子化、重排、硫酸氧化形成共扼双键发色团，随着反应的进行，最大吸收波长发生红移。加入少量铁盐可加速呈色反应的速率和提高稳定性，同时加入苯酚可消除反应产生的荧光，并加速红色产物的形成。用本法测定各类制剂时，采用分离提取步骤，严格控制反应条件，并扣除背景干扰，以减少误差，可获得良好结果。

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