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简答题试述PCR技术的基本原理及主要操作步骤。
  • 原理:以拟扩增的DNA为模板,以一对分别与模板5'-端和3'-端互补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DNA片段得到扩增。主要步骤:①变性,将反应体系加热至95℃,使模板DNA完全变性成为单链,同时引物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消除;②退火,将温度下降至适宜温度(一般较Tm低5℃)使引物与模板DNA退火结合;③延伸,将温度升至72℃,DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述
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