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简答题简述GGT活性的测定原理及方法学评价。
  • GGT的测定原理:以色素原GCNA为底物，甘氨酰甘氨酸为受体，GGT催化Υ-谷氨酰基团从GCNA转移到甘氨酰甘氨酸上，并游离出2-硝基-5-氨基苯甲酸。2-硝基-5-氨基苯甲酸的生成量与样品中的GGT活性成正比关系，因此，测定405nm处的吸光度增量可计算出GGT的活性。方法学评价:GCNA第3位上含有亲水基团羰基，溶解度增加，且底物稳定性较好，自身水解作用小。需要注意的是:①原IFCC推荐方法测定的pH为8.20，反应温度为30℃，若反应温度37℃：时最适pH则为7.70，并要以甘氨酰甘氨酸和氢氧化钠作缓冲体系，甘氨酰甘氨酸既是缓冲液又可看成是底物，与甘氨酸或甘氨三肽为受体相比，酶促反应速度可以提高5倍。②2-硝基-5-氨基苯甲酸在410nm处的摩尔消光系数为7.96x103(pH为7.70)，受pH和温度影响较大。若选择401nm或405mn时需注意校正。③由于产物摩尔消光系数较小，样品用量大，样品体积分数0.0909，为了样品和反应液在37℃平衡，故需要孵育时间180秒，并采用底物启动模式。

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