试题详情
简答题简述GGT活性的测定原理及方法学评价。
  • GGT的测定原理:以色素原GCNA为底物,甘氨酰甘氨酸为受体,GGT催化Υ-谷氨酰基团从GCNA转移到甘氨酰甘氨酸上,并游离出2-硝基-5-氨基苯甲酸。2-硝基-5-氨基苯甲酸的生成量与样品中的GGT活性成正比关系,因此,测定405nm处的吸光度增量可计算出GGT的活性。方法学评价:GCNA第3位上含有亲水基团羰基,溶解度增加,且底物稳定性较好,自身水解作用小。需要注意的是:①原IFCC推荐方法测定的pH为8.20,反应温度为30℃,若反应温度37℃:时最适pH则为7.70,并要以甘氨酰甘氨酸和氢氧化钠作缓冲体系,甘氨酰甘氨酸既是缓冲液又可看成是底物,与甘氨酸或甘氨三肽为受体相比,酶促反应速度可以提高5倍。②2-硝基-5-氨基苯甲酸在410nm处的摩尔消光系数为7.96x103(pH为7.70),受pH和温度影响较大。若选择401nm或405mn时需注意校正。③由于产物摩尔消光系数较小,样品用量大,样品体积分数0.0909,为了样品和反应液在37℃平衡,故需要孵育时间180秒,并采用底物启动模式。
  • 关注下方微信公众号,搜题找答案

热门试题